淋球菌性腹膜炎检查

1.外周血象 白细胞计数>15*109/L，中性粒细胞增多。

　　2.细菌学检查

　　(1)分泌物镜检：

　　①尿道(男性)或阴道分泌物镜检：可有大量红色多形核白细胞。在有些细胞中吞噬有淋球菌。淋球菌为革兰阴性，呈卵圆形或圆形，常成双排列，两菌接触面扁平或稍凹。菌体长约0.7µm，宽约0.5µm。但两菌大小可有差异。多数多形核白细胞中并不含淋球菌，但不少白细胞中常含有1对至数对，甚至数十对淋球菌。淋球菌常位于细胞质内。

　　病期较长或经过治疗的淋病患者，其分泌物涂片中淋球菌数目较少，有时呈单个、四联和八叠状，且常位于细胞外。

　　尿道分泌物标本制作法：用浸有灭菌等渗盐水的拭子揩洗尿道口，然后用手指由后向前挤出脓液，用棉拭子蘸取脓液后轻轻涂布于载玻片上。待自然干燥后加热固定，染色(常用革兰染色，也可用亚甲蓝染色)，镜检。

　　②腹腔分泌物检查：腹腔穿刺抽液，脓液呈黄白色、稀薄、量少，无臭味。涂片可找到淋病双球菌或PCR球菌，DNA检查阳性。

　　③注意事项：

　　A.淋病的诊断标准是可见“细胞内革兰阴性双球菌”，故涂片宜动作轻柔，且棉拭子不得在玻片上滚动，以防止细胞破裂或变形，细菌从细胞内逸出，造成诊断上的混淆。

　　B.涂片薄厚适当。涂片过厚易造成脱色时间不足，使革兰阴性菌也呈现紫色。大量染片时，最好用已知的革兰阳性菌(如葡萄球菌)和阴性菌(如大肠埃希菌)作对比观察。

　　C.固定涂片时，只需迅速通过火焰2～3次即可，避免加热过度致细胞变形。一般涂片至手背之上以不感到太烫为宜。

　　(2)淋球菌培养：

淋球菌培养是WHO推荐的淋病筛查的惟一方法，也是诊断的“金标准”。

　　常用血液琼脂或巧克力琼脂培养基培养。为抑制杂菌，可加入适量抗菌物质，如多黏菌素B(25µg/ml)和万古霉素(3.3µg/ml)等。

　　淋球菌在血平皿上经24～48h的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，边缘呈花瓣状，直径为0.5～1.0mm，用接种环触之有黏性。如继续培养，菌落面积增大，表面变得粗糙，边缘出现皱缩。若从菌落上取材作涂片，可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，约有25%的菌为典型的双球菌，其他75%为单球菌、四联形或八叠形。

　　使用液体培养基时，淋球菌生长于液体表面，稍有轻度混浊和颗粒沉淀。

　　培养标本采集和送检中应注意：

　　①深部取材：从男性尿道取材时，应将细小棉拭子伸入到尿道内2～4cm处，取出带有黏膜细胞的分泌物。从女性宫颈取材时，应先用温水湿润扩阴器(不要用液体石蜡等润滑油)，然后将棉拭子插入宫颈管1.0～1.5cm，转动并停留10～30s。有时为了提高阳性率，可同时取2份标本进行培养，但工作量也相应增加。

　　②及时送检、接种：淋球菌对环境变化敏感，耐寒、耐干的能力弱。因此，标本离体后要立即送检。若实验室较远，可将标本接种于Stuart或Amies运送培养基或浸入1%葡萄糖肉液浸中，途中保温。

　　(3)氧化酶试验：

是淋球菌重要的初步诊断试验之一。淋球菌在生长过程中能产生氧化酶。在经24～48h培养的菌落上滴加氧化酶试剂(0.5%～1%盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺水溶液)，其菌落变成紫红乃至黑色者为阳性反应。但氧化酶试验阳性者并不完全是淋球菌。

　　为保证氧化酶试验结果的准确性，操作中应注意3个问题：

　　①氧化酶试剂要新鲜：正常的氧化酶试剂(盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺)为淡红色。若试剂变成灰色或黑色，说明已经失效。配制的试剂溶液需放在棕色玻璃瓶中避光保存，有效使用时间约1周。

　　②避免使用铁质接种环：氧化酶试剂与铁离子接触会产生红色的化学变化，造成“阳性”假象，故淋球菌接种应避免使用旧铁丝或电炉丝等制成的接种环。试验前亦应检查接种环与试剂接触是否有红色出现。

　　③需要保留菌种时，应在菌落尚未完全变黑时挑出少许转种。菌落一旦变黑，多数细菌即告死亡。

　　(4)过氧化氢酶试验：

淋球菌可产生过氧化氢酶。该酶能使过氧化氢迅速分解成水和氧气，出现气泡。用作淋球菌的初步鉴定。

　　①方法：用接种环挑取一菌落置于干净载玻片上，取30%(V/V)过氧化氢溶液1滴加于可疑菌落表面，在1s内有大量气泡产生，为阳性反应。如反应迟缓或产生气泡弱为阴性反应。

　　②注意：某些非致病的奈瑟菌亦可为阳性反应。阴性反应可除外淋球菌。

　　(5)直接免疫荧光试验：

将荧光素标记的淋球菌抗血清(单克隆抗体)滴于可疑菌上，遇到淋球菌(抗原)时，抗体与抗原结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色荧光的菌体。本法检测快速、死菌亦可有阳性反应。

　　(6)酶反应：

淋球菌具有特殊的酶类，能使某些酶的产色底物显色，据此与其他奈瑟菌区别开来。临床用于淋球菌鉴定。

　　选择做腹部B超及腹平片检查。