简介:自然杀伤细胞又称NK细胞,其主要的功能特征是对肿瘤细胞及病毒感染...[展开]
简介:自然杀伤细胞又称NK细胞,其主要的功能特征是对肿瘤细胞及病毒感染细胞具有非特异性的杀伤力,这种杀伤效应不依赖抗体与补体,体外检测NK细胞活性是诊断NK细胞功能及其与某些疾病关系的一个重要手段。[收起]
自然杀伤细胞活性检测是诊断NK细胞功能及其与某些疾病关系的一个重要手段。K细胞主要分布在腹腔渗出液,外周血、脾脏中;NK细胞主要分布在骨髓、外周血和脾脏中。临床主要用于肿瘤、病毒感染、寄生虫感染、自身免疫和移植免疫等病人,检测其K、NK细胞杀伤功能,在维持和调节特异性免疫中起重要作用。
(1)效靶细胞作用:将分离好的淋巴细胞悬液(效应细胞)和标记的K562细胞(靶细胞)按100∶1的比例加入平底塑料试管中,按表1操作,同时设自然释放管(作为对照管),每个标本作了3个复管,最后用培养液使每管增至1ml,1500r/min离心,促进效靶细胞结合,置37℃、5% CO2孵箱内孵育18h。
(2)酶促反应:取出孵育试管,弃去各管上清液,剩下的细胞加一定浓度(2.2g/L)胰蛋白酶和DNA酶各0.1m1,混匀后37℃水浴30min,促使被攻击的靶细胞释放125IUdR,随后各管立即加入0.8ml Hank液终止酶促反应。混匀后1500r/min离心2min。
(3)测放射强度和计算:用γ型计数器分别测各管(上清和细胞管)cpm值