简介:厌氧菌的分离与鉴定是对氧敏感度高的细菌进行分离与鉴别的试验,因...[展开]
简介:厌氧菌的分离与鉴定是对氧敏感度高的细菌进行分离与鉴别的试验,因为厌氧微生物在自然界分布广泛,种类繁多,其生理作用日益受到人们的重视。专性厌氧菌,对氧气非常敏感,因此,他们的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。[收起]
厌氧菌的分离与鉴定是对氧敏感度高的细菌进行分离与鉴别的试验,因为厌氧微生物在自然界分布广泛,种类繁多,其生理作用日益受到人们的重视。用于有糖尿病,严重肝病,肝硬化,尿毒症,褥疮溃疡,肢体坏疽,肉毒中毒等症状的患者的诊断。
分离
1编号 取五支无菌水试管,分别用记号笔标明10-1、10-2……10-5。
2稀释 在无氧无菌的超净厌氧手套箱中的条件下,用无菌注射器吸取1mL混合均匀的液体样品,加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中,用震荡器将其混合均匀,制成10-1稀释液。用无菌注射器吸取1mL10-1稀释液至另一装有9mL生理盐水的厌氧试管中,制成10-2稀释液。依此进行10倍系列稀释,至10-6,制成不同样品稀释液。通常选10-4、10-5、10-6三个稀释度进行滚管计数。 3滚管分离
1)滚管 将无氧无菌的琼脂培养基在沸水浴中溶化,置46-50℃恒温的水浴中,待用,当培养基从瓶中取出时,要用N2在培养基内中充气。再在试管中用N2充气,赶走所有管内空气,然后把培养基加入管内,立即塞上瓶塞。待瓶塞塞入管内,及时拔出充气针头。用无菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三个稀释度各0 .1mL,分别注入待用的试管中,然后将其平放于盛有冰水的瓷盘中迅速滚动,带菌的溶化琼脂在试管内壁会即刻形成凝固层。
2)分离纯化 生成的菌落需挑取出来,镜检其形态及纯度。如尚未获得纯培养物,需再次稀释滚管,并再次挑取菌落,直至获得纯培养物为止。待挑取的单菌落预先在放大镜下观察确定,做好标记。