简介:T淋巴细胞表面有多种抗原,其中簇分化(CD)抗原分类甚多,这些抗原除...[展开]
简介:T淋巴细胞表面有多种抗原,其中簇分化(CD)抗原分类甚多,这些抗原除了标记细胞的种类和分化阶段外,同时也有一定的功能,或作为受体、黏附分子、信号传递成分等,可通过这些表面特征性抗原鉴别亚群。目前开展较多的是用抗分化抗原的单克隆抗体,如抗CD4单克隆抗体,对外周血单个核细胞进行检测,根据出现阳性率,判定亚群分布。T淋巴细胞亚群是观察机体细胞免疫水平的重要方法,对恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺乏症、血液系统疾病的诊断、治疗及预后判断有重要价值。T细胞亚群之间有相互制约和相互辅助的作用,任何一方的增多或减少皆影响另一亚群的形成失调。[收起]
T4淋巴细胞亚群试验是观察机体细胞免疫水平的重要方法。对恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺乏症、血液系统疾病的诊断、治疗及预后判断有重要价值。降低:低丙种球蛋白血症、细菌感染、某些病毒感染。升高:急性移植物抗宿主病(GVH)、肉瘤、硬皮病、皮肤黏膜淋巴结综合征。
1)直接免疫荧光法 ①取肝素抗凝外周血,用淋巴细胞分层液获得单个核细胞,Hank液配成(1~2)×106细胞/ml。 ②取1ml细胞悬液加入5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。 ③加FITC-CD4 20μl,对照管加mIgG-FITC,4℃反应30min。 ④Hank液洗2次,2000r/min,2min。 ⑤流式细胞计分析。
(2)间接免疫荧光法 ①分离PBMC,调至(1~2)×106细胞/ml。 ②取1ml细胞悬液于5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。 ③加抗CD4单克隆抗体100μl,对照管加抗体稀释液或正常小鼠IgG,4℃反应30min。 ④Hank液洗2次,离心2000r/min,2min,弃上清。 ⑤加50μl FITC-IgG,4℃反应30min。 ⑥Hank液洗2次,2000r/min,2min。 ⑦滴片,荧光显微镜观察或流式细胞计分析