热盐水试验是利用热盐水对血细胞进行检查,用于检查细胞核溶解情况。有助于急性白血病细胞类型的鉴别
样本处理:
a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer,再加入50ul Reagent A , 0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织,可用双层纱布过滤。
b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800*g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5*107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,再加入50ul Reagent A,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨细胞20~30次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中,4℃,700*g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部,弃上清。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀;
3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重悬液,沿管壁小心地加入到此离心管中,置于Medium Buffer之上,4℃, 700*g 离心5min。将上清转移到新离心管,细胞核沉淀在管底;
5. 弃上清,在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉,1000*g 离心10min ,弃上清,得较纯的细胞核沉淀;
6. 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。