(1)取孕期16～20周羊水15～30ml，1000r/ml离心10min。

(2)弃去多余上清液，留1ml羊水和沉淀细胞，轻轻打散成细胞悬液。

(3)移入25ml方形培养瓶中，加pH6.5～6.8(含青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml)的培养基3ml及小牛血清1ml，置37℃温箱中培养。

(4)培养7～10天后可见大量成纤维样或上皮样细胞集落。此时可调换新鲜培养液。

(5)待细胞集落扩大成片，并有许多透亮的圆形分裂细胞时，即可加入秋水仙素，使最终浓度为0.1～0.3μg/ml，置37℃温箱中再培养5～6h(上述过程均在无菌条件下进行)。收获标准：①以成纤维细胞为主要类型，成片细胞生长;②以10倍目镜和20倍物镜观察，生长的细胞克隆覆盖1个或1个以上完整视野;③见到10个以上透亮的圆形细胞和10个以上双圆形光亮的分裂细胞。

(6)如果细胞生长不旺盛，生长周期不齐或细胞老化，未达收获标准，可在原瓶继续传代培养。方法：在无菌条件下先倒去培养液，加入2.5g/L无菌胰蛋白酶液数滴，摇动后倒去。再加入胰蛋白酶5～10滴，在37℃下轻轻摇动约5min，使贴壁细胞脱落。加入含小牛血清的新鲜培养基4ml，在37℃静置培养4～5h。再小心更换培养液，继续培养，一般传代后3～5天即可收获。

(7)将培养液移至刻度离心管中，加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培养瓶内，置37℃温箱中5min，然后用弯头吸管冲洗贴壁细胞(也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化)。将脱离瓶壁的细胞倒入离心管中，与原培养液相混合，并用少量温热生理盐水冲洗培养瓶，洗下的细胞也一并倒入该离心管，以1000r/min离心10min。

(8)吸弃上清液，加入预温37℃的0.075mol/LKCl低渗液3～5ml，置37℃10～15min。

(9)预固定、固定及制片均与外周血细胞染色体标本的制备法相同。