简介:HDV为缺陷病毒,依赖HBsAg才能复制,表现为HDV、HBV同时或重叠感染,其...[展开]
简介:HDV为缺陷病毒,依赖HBsAg才能复制,表现为HDV、HBV同时或重叠感染,其传播途径主要是生活接触,也可通过血液制品、输血、注射等途径传播。其实验室检查主要是检测抗原和抗体。[收起]
抗丁型肝炎病毒IgM抗体主要用于丁型肝炎的诊断。凡IgM抗HDV抗体阳性表示近期或HDV感染急性期,如抗体出现波动是慢性HDV感染的一种表现,如配合抗HBc IgM检测还能区别是与HBV合作感染还是重叠感染,故具有重要诊断价值。
(1)用0.05mol/L pH9.5~9.6的碳酸盐缓冲液稀释抗人IgM单克隆抗体,包被聚苯乙烯板,每孔100μl,放4℃过夜。
(2)用PBS T洗3次(中间不停留)拍干。
(3)每孔分别加入100μl1∶1000稀释后的待检血清和阴、阳性对照血清(阴性对照3孔,阳性对照2孔)放37℃1h。
(4)负压下用PBS T洗板3次(方法同上)抽干(将血清和废液抽到消毒瓶内防止污染环境)。
(5)每孔加入50~100μl经适当稀释后的HDAg(2~4个ELISA单位)放45℃1h。
(6)洗3次后,每孔加入50μlHRP-抗-HDV IgG抗体(于含1%小牛血清的PBS中)放42~45℃1h。
(7)洗3次后,加50μl新鲜配制的底物液,放室温暗处显色15~30min,当阳性对照显黄色后,每孔加入1滴(25μl)2mol/L H2SO4终止反应