简介:精子凝集试验从最初由Kibrik等(1952年)创立的白明胶内精子凝集试验开始...[展开]
简介:精子凝集试验从最初由Kibrik等(1952年)创立的白明胶内精子凝集试验开始连同其后的发展,一共有4种:①明胶凝集试验(Kibrik,1952);②试管玻片凝集试验(Franklin,Dukes,1964);③毛细管凝集试验(Shulman,Hekman,Pann,1971);④浅盘凝集试验(Friberg,1974)。[收起]
精子凝集试验对精子凝集症的不育患者的诊断有意义。精子成小凝集块,对光观察可见小凝集块有如雪花纷飞状可诊断为精子凝集症。 需要检查的人群:精子凝集症的不育患者。
明胶凝集试验(gelatin agglutination test,GAT)
1.准备
(1)配制 Baker液(Bakersolution) 葡萄糖3.00gNa2HPO4·7H2O0.46g NaCl0.20gKH2PO40.01g 加双蒸水至 100mL。
(2)用 Baker液配制 10% 白明胶溶液,并置 37℃ 水浴中备用。
(3)精子悬浮液:取正常新鲜精液(精子密度为 80*106/mL 左右,活动率 >60% ,a、b两级活动精子 >70% ),室温液化,用 Baker液稀释至 40*106/mL,置 37℃ 水浴中保存备用。
(4)待检血清及对照血清处理,均经 56℃ 水浴加热 30min,以灭活补体。随后用 Baker液,将两种血清均作 1∶4~ 1∶32倍数稀释,存放于 37℃ 水浴中备用。
2.方法
(1)取一定量的精子悬浮液,加入等量的 10% 明胶溶液,充分混合后,取 0.3mL 分别加入装有 0.3mL 对倍稀释血清的各支小试管内,并使其充分混合。
(2)将混合液分别用毛细吸管移置另一小试管(3mm*30mm)内,37℃ 孵育 2h,移置 4℃放置 5min,待明胶凝固后,观察明胶内精子凝集情况,并判断结果。
3.判断
(1)阴性:精子在明胶内均匀分散,若以黑纸作背面对光观察,呈均匀乳白色,不见凝集块。
(2)阳性:精子成小凝集块,对光观察可见小凝集块有如雪花纷飞状,不难鉴别。
(3)抗体效价:以阳性反应的最高血清稀释倍数为血清凝集抗体效价。