1常用的方法有琼脂平板法、比浊法。　　

1.溶壁微球菌平板的制备 溶壁微球菌在使用前于琼脂斜面培养基上传代一次，然后再接用于普通琼脂平板37℃培养24h。用无菌蒸馏水洗下菌苔，2000r/min离心30min，弃上清。再加蒸馏水轻轻混匀，2000r/min离心30min，弃上清，称沉淀物湿重，用无菌蒸馏水配成100g/L的浓菌液(菌液应在临用前配制，不宜存放过(9)，加热杀死，备用。　　

2.称琼脂粉1g，加入的1/15mol/L pH6.4PBS 100ml，即成1%琼脂。　　

3.取溶菌酶标准品，用1/15mol/L pH6.4PBS制成5、25、100mg/L稀释液。　　

4.取己配制好的菌液1ml，加到50～60℃己溶化的1%琼脂中，摇匀，倾注平板(直径7～9cm平板加1%琼脂15ml)，待冷凝。　　

5.用打孔器在溶壁微球菌琼脂平板上打孔，孔间距18～20mm，用牙签挑去孔内琼脂。　　

6.用毛细吸管取唾液(新鲜收集，盛于洁净平皿内，取上层清液)或血清，加入琼脂孔内。同时在另一孔内加满标准溶菌酶作为阳性对照。　　

7.置25～30℃ 18～24h，观察结果。　　

8.在每批测定同时，将各种浓度的溶菌酶标准液加于小孔中，同法测定溶菌环直径，用半对数纸，以溶菌酶浓度为纵坐标(对数坐标)，溶菌环直径为横坐标，绘制标准曲线。从曲线上查出每毫升待检品所含溶菌酶的微克数。