简介：混合淋巴细胞培养试验(mixedlymphocyteculture，MLC)是一种测定受体和供体主...[展开]
简介：混合淋巴细胞培养试验(mixedlymphocyteculture，MLC)是一种测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容程度的试验方法，常用于器官移植前的组织配型.混合淋巴细胞培养将供者与受者的淋巴细胞做双向混合培养，或者灭活供者的淋巴细胞做向混合培养，细胞反应的程度与供-受者相容的程度呈负相关的试验。[收起]
混合淋巴细胞培养试验为与供-受者相容的程度呈负相关的试验。异常结果：肾移植时，活体供肾者的转化率应10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。淋巴细胞转化率10%者为不同两个体间的组织是相容的。 淋巴细胞混合培养试验用以检测患者的免疫状态。T淋巴细胞数减少时，转化率也降低。 可作为器官和骨髓移植的配型方法之一，用来选择合适的供体。如转化率高为供受者分歧用。转化率低，移植后的成功率高。
1.供体淋巴细胞的制备 新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中，轻稳加在液面上.
2000 r/min离心20 min，吸取中间雾状淋巴细胞层. 生理盐水洗涤2次. 台盼蓝染色，计数板计数. 调整细胞密度为2×109/L，分成3管，各自离心，留取沉淀. 每管中加入250 μL丝裂霉素(终浓度50 mg/L)和1.75 mL生理盐水，37℃水浴40 min， 生理盐水离心洗涤2次. 用含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640液调整细胞密度为1×1010/L.加入抗体封闭抗原.标记为D。
2.受体淋巴细胞的制备 新鲜外周静脉血按1∶1比例加在装有比重为1.077的淋巴细胞分离液的离心管中，轻稳加在液面上.
2000 r/min离心20 min，吸取中间雾状淋巴细胞层. 生理盐水洗涤2次. 用含120 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养液调整细胞密度为1×1010/L. 标记为R。
3.混合淋巴细胞培养 将已制备好的R和D按如下分组加入96孔板，置37℃，50 mL/L CO2孵箱中培养24 h. A组：R 50 μL+D 50 μL;B组：R 50 μL+D 50 μL+IL？2纯化中和mAb 15 μL;C组：R 50 μL+IL？2纯化中和mAb 15 μL;D组：R 50 μL. 每组3个复孔，空白对照组为RPMI 1640培养液100 μL