简介：端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构，由一富含鸟嘌呤的重复DNA...[展开]
简介：端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构，由一富含鸟嘌呤的重复DNA序列及其相关蛋白组成。端粒是保护染色体末端稳定必不可少的结构。端粒长度的维持需要端粒酶活性的存在。永生细胞和肿瘤细胞能够长期生存，端粒酶起到了重要的作用。端粒酶是由RNA和蛋白体组成的复合体，属一种专一的依赖RNA的逆转录酶，能以自身的RNA为模板，从头合成染色体末端的端粒DNA，弥补细胞分裂时端粒DNA的丢失，维持端粒的长度，保持染色体的动态平衡，使细胞获得永生化。自1994年Kim建立了高敏感度的、以PCR为基础的检测端粒酶的方法以来，端粒酶引起了人们的广泛关注。人们发现，端粒酶与细胞的增生、分化和不死性有着极为密切的关系，已成为目前肿瘤和衰老基础研究的热点之一。[收起]
端粒酶活性检查对多种癌症的诊断有参考价值。肝癌患者有较高的端粒酶阳性率，端粒酶活性阳性者AFP水平明显高于端粒酶活性阴性者。端粒酶有可能成为诊断肝癌的肿瘤标志物。端粒酶在大多数恶性肿瘤组织有较高水平表达，如神经母细胞瘤、乳腺癌、大肠癌、胃癌、前列腺癌、肺癌等。端粒酶活性与肿瘤的临床分期及预后密切相关。因此，端粒酶是目前最特异和具有普遍性的肿瘤标记物。
1反应周期：①变性：90℃ 30～60s；②引物和模板的退火温度：40～60℃ 30～60s；③延伸：72℃ 1～2min。
2经反复循环30～40次，最后1次72℃引物延伸7min后终止。除去液体石蜡后，产物可供分析。
3经琼脂糖凝胶电泳后，用溴乙锭染色，经紫外灯照射可见预料扩增长度的荧光条带。产物也可与放射标记或非放射标记的寡聚核苷酸探针行Southern印迹杂交或点渍印迹杂交。
4如用PCR自动仪则更为方便，将反应试剂、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入试管后，放进已调好程序，即所需变性→退火→延伸各自的温度和时间及循环次数的自动仪中进行反应，即可获得满意的扩增产物