简介：当特异的效应T淋巴细胞在体外与靶细胞接触时，可表现出破坏和溶解靶...[展开]
简介：当特异的效应T淋巴细胞在体外与靶细胞接触时，可表现出破坏和溶解靶细胞的特性，称为淋巴细胞毒作用(cytotoxicity)。靶细胞可以是肿瘤细胞或其它组织细胞。淋巴细胞杀伤靶细胞的方式可通过直接杀伤或产生淋巴因子破坏靶细胞。本试验方法有形态检查法和同位素释放法两种。前者不需特殊设备，只需用显微镜计数靶细胞的存活数，操作比较方便。后者则是用125I-脱氧脲嘧啶核苷或51Cr标记靶细胞，以放射性同位素的释放作为靶细胞受损伤的指标。此法需要特殊设备如液闪仪等，但可自动测量，结果重复性好。[收起]
1.微量淋巴细胞毒试验又称为补体依赖性细胞毒实验，目前统一使用改良的微量淋巴细胞毒试验，主要用于HLA血清学分型试验。基本方法是取HLA分型血清，加入被检者淋巴细胞，在补体的参与下可以使携带与分型血清型相同抗原的淋巴细胞死亡，判定被检者HLA型别的一种方法。 2．微量淋巴细胞毒试验是检查某种抗原或抗体存在的一种技术手段，这一技术目前主要应用于器官移植的HLA配型实验。根据实验结果分析供受体间HLA型别的一致性，或确定各自携带的HLA型别。HLA型别的一致性基本决定了受体移植器官存活的可能性。
1靶细胞的接种：选用能贴壁生长的肿瘤细胞，用Hank液洗涤后经2.5g/L胰酶消化2～3min，倒去胰酶液(细胞仍贴在瓶壁)，用Hank液轻洗细胞3次，倒去Hank液。用含10%～20%小牛血清的RPMI 1640液将贴壁细胞冲洗下来，用100目滤网过滤除去细胞团块，制备成1×106/ml单个肿瘤细胞悬液，用滴管吸取细胞悬液滴入40孔培养板中，每孔1滴(约含100～150个细胞)，置培养板于37℃含5% CO2孵箱中20h。取出培养板甩去其中培养液，瑞氏染色后计数每10孔中平均贴壁的肿瘤细胞数，如果两组平均数相差＞1/3，表明误差太大不能使用，如果误差不大其它各培养板可进行正式试验。
2分离淋巴细胞：取受检者肝素抗凝血3ml，用聚蔗糖-泛影葡胺分层液分离淋巴细胞后再用Hank液洗3次，然后用RPMI 1640液配成(2～3)×105/ml细胞悬液。
3细胞毒试验：淋巴细胞和靶细胞按200∶1比例混合，每孔中加入(2～3)×104个淋巴细胞(0.1ml体积中)约每孔再加入含20%小牛血清的RPMI 1640液0.1ml，置培养板于37℃ 5%CO2孵箱中40h。取出培养板甩去培养液，瑞氏染色后于显微镜下计数培养板底部残留的靶细胞数。